Isolement et identification des bactéries pathogènes impliquées dans le cancer gastrique au niveau de la wilaya de Sidi Bel Abbes

Abstract

-------------------------------------------------------------------------------------------------------resume en arabe-------------------------------------------------------------------------------------------- [الهيلوباكتر بيلوغي ] هي بكتيريا متسببة في عدة امراض معدية, كالتهاب المعدة, القرحة و سرطان الملوية البوابية المعدة و تصيب هذه العدوى نصف سكان العالم خاصة الدول السائرة في طريق النمو. يتمثل هدف هذا العمل في تقييم نسبة سرطان الانبوب الهضمي خاصة سرطان المعدة بالنسبة للسن و الجنس, تحديد نسبة الملوية البوابية هذه البكتيريا المتسببة في سرطان المعدة في ولاية سيدي بلعباس خلالاالسنوات [2012ـ2014] , ودراسة تاثير مختلف العوامل الوبائية وكدلك الامراض المعدية المرتبطة بهذه العدوى ثم دراسة التعريف الجزيئي لعينات الملوية البوابية عن طريق تضخيم جزء من الحمض النووي المسؤول عن الجين اليوري س دراسة نشاط تثبيط بكثيريا حمض اللاكتيكك [ Streptoccocus thermophilus Lactobacillus Spp Bifidobactérium Spp,] ضد الملوية البوابية بطريقة النشر في اجار وتم البحث عن المادة المثبطة بطريقة زرع الملوية البوابية في وسط نمو ووسط سائل مغدي وذلك بتعديل الحمض. بينت نتائج التحاليل الاحصائية في ولاية سيدي بلعباس خلال السنوات [2012ـ2014] بان امراض الانبوب الهضمي مرلبطة ارتباطا قويا بجنس المريض [ 0,001 >p], وحسب توزيع سرطان الانبوب الهضمي, يحتل سرطان المعدة المركز الاول بنسبة 45,94℅. من جهة اخرى تمت الدراسة الاستطلاعية خلال ثمانية عشرة شهرا[2016ـ2017] والتي يشمل 201 مريض باعراض, تم خضوعهم بفحص عن طريق المنظار المعدي مستوى بالمستشفى الجامعي بسيدي بلعباس, تم توجيه الوخزات المعدية للدراسة النسيجية ودراسة الزرع للبكتيريا الملوية البوابية. اعطت نتائج دراسة مقاومة بكتيريا الملوية البوابية للمضادات الحيوية، مقاومة مهمة ب : (%0, 1.62,3.25,04.87,08.13,10.56,18.69,52.84) على الترتيب بالنسبة للمضادات الحيوية التالية (chloranphénicol, ciproflaxacine ,érythromycine, clarithromycine, métronidazole, tétracycline, amoxicilline lévoflaxacine,) . يتراوح معدل السن ل 201 مريض الى [47,29±15,97] , نسبة الجنس هو 0,8 .تقدر النسبة العامة لعدوى الملوية البوابية ب61,2 ℅[201⁄123 ] . ووجدت هذه النسبة بعد التحليل الاحصائي مرتبطة اجابيا بالسن,ومرتفعة خاصة لدى المرضى التي تتراوح اعمارهم بين [20ـ30]ـ[50ـ60]سن من جهة اخرى الجنس ليس له تاثير على هذه العدوى،و وجدت النسبة العامة لعدوى الملوية البوابية اكثر انتشارا لدى المرضى المعانين من التهاب المعدة ، فقد تبين في دراستنا ان نسبة العدوى الملوية البوابية مرتفعة في سيدي بلعباس خاصة لدى المرضى الذين تتراوح اعمارهم بين [20ـ30]ـ[50ـ60]سنة، ونسبة التهاب المعدة مرتقعة، والتي تعتبر مؤشرا خطرا للاصابة بسرطان المعدة، تمس النسبة العليا للقرحة المعدية المرضى الذين تتراوح اعمارهم بين [51ـ60]سنة ب(33.7%) و فوق هذا السن تنخفض النسبة ليظهر بارتفاع عدد المصابين بسرطان المعدة ب60% عند المرضى الذيت تتراوح اعمارهم بين [61ـ70] سنة. اعطت دراسة التفاعل بين بكتيريا حمض اللاكتيك و الملوية البوابية نتائج اجابية بتواجد مناطق تثبيط(Lactobacillus ، Streptoccocus thermophilus ،Bifidobactérium Spp) تمنع منعا جيدا لنمو سلالة الملوية البوابية بمنطقة تثبيط قطرها (9،7،15ملم) على الترتيب للسلالة رقم 14،ومنعا معتدلا جيدا لنمو سلالة الملوية البوابية بمنطقة تثبيط قطرها ( 12, 5,8ملم) على الترتيب للسلالة رقم90 , ومنعا ضعيفا جيدا لنمو سلالة الملوية البوابية بمنطقة تثبيط قطرها (8, 3, 5 ملم) على الترتيب للسلالة رقم 123 . طبيعة المكونات الموجودة في معلق Spp Bifidobactérium للملوية البوابية اثناء زرعها في وسط سائل و بعد تعديل الحمض ، انها بروتينية. سمحت الدراسة الجزيئية Ure C لسلالات الملوية البوابية المعزولة من سرطان المعدة بمعرفة الملوية البوابية مع درجة التطابق ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------resume en français-------------------------------------------------------------------------------------------------Hélicobacter pylori est un germe responsable de multiples pathologies gastroduodénales telles que la gastrite, l’ulcère et le cancer gastrique dont l'infection touche la moitié de la population mondiale, principalement dans les pays en voie de développement. L'objectif de ce présent travail est l'évaluation de la fréquence des cancers digestifs en particulier le cancer gastrique selon l’âge et le sexe, la détermination de la prévalence de d’Helicobacter pylori, bactérie impliquée dans le cancer de l’estomac au niveau de la wilaya de Sidi Bel Abbes durant les années (2012-2014), l'étude de l'impact des différents facteurs épidémiologiques et l'exploration des principales maladies gastriques associées à cette infection à travers une étude prospective durant 18 mois (2016-2017). L'étude de l'activité antagoniste de certaines bactéries lactiques telles que Streptococcus thermophilus, Lactobacillus spp, Bifidobactérium spp vis-à-vis de l’Helicobacter pylori est mise en évidence par la méthode de diffusion sur la gélose. La caractérisation des molécules responsables des activités antagonistes est effectuée lors de l'inoculation de l'H. pylori dans un milieu de culture liquide et la neutralisation de l'effet des acides organiques produites par les bactéries lactiques testées. Enfin, une identification moléculaire a été réalisée de la souche incriminée dans le cancer gastrique par amplification du fragment d'ADN, codant la région Ure C. Les résultats obtenus ont montré que l’analyse statistique effectuée durant les années (2012-2014) au niveau de la wilaya de Sidi Bel Abbès ont révélé que les pathologies digestives sont fortement dépendantes du sexe du patient (p<0,001), et la répartition des cancers digestifs, le cancer gastrique occupe la première place avec une fréquence de 45,94%. Par ailleurs, l’étude prospective effectuée pendant 18 mois (2016-2017) sur 201 patients symptomatiques, recrutés au niveau du Centre Hospitalier et Universitaire de Sidi Bel Abbès, référés pour une fibroscopie gastrique, bénéficiés de biopsies gastriques pour étude histologique et l'identification de germes responsable. Les résultats de l'antibio-résistance obtenus ont montré que les 123 souches isolées de l'H. pylori ont manifesté une importante résistance de (52,84, 18.69, 10.56, 08.13, 04,87, 3,25, 1,62, 0 %) vis-à-vis de métronidazole, clarithromycine, érythromycine, ciproflaxacine, chloranphénicol, l’amoxicilline, la tétracycline et de la lévoflaxacine respectivement. -------------------------------------------------------------------------------------------------resume en anglais------------------------------------------------------------------------------------------------gastric diseases associated with this infection. The study of the antagonistic activity of certain lactic acid bacteria such as Streptococcus thermophilus, Lactobacillus spp, and Bifidobacterium spp with respect to Helicobacter pylori is demonstrated by the agar diffusion method. The characterization of the molecules responsible for the antagonistic activities is carried out during the inoculation of H. pylori in a liquid culture medium and the neutralization of the effect of organic acids produced by lactic acid bacteria tested. Finally, a molecular identification was realized of the incriminated strain in gastric cancer by amplification of the DNA fragment, encoding the Ure C region. The results obtained showed that the statistical analysis carried out during the years (2012-2014) at the level of the wilaya of Sidi Bel Abbes revealed that the digestive pathologies are strongly dependent on the sex of the patient (p <0.001), and the distribution digestive cancers, gastric cancer occupies the first place with a frequency of 45.94%. In addition, the prospective study carried out for 18 months (2016-2017) on 201 symptomatic patients, recruited at the Hospital University Center of Sidi Bel Abbes, referred for a gastroscopic fibroscopy, benefited from gastric biopsies for histological study and the responsible germ identification. (47.29 ± 15.97 years) with a sex ratio of 0.8 and an overall prevalence of Helicobacter pylori infection of 61.2% (123/201). In this statistical analysis, it seems that this rate is significantly related to age, with a particular increase in patients aged (20-30 and 51-60) years. In addition, the sex parameter showed no effect on the prevalence of Helicobacter pylori infection. In addition, H. pylori infection is frequently abundant in the case of gastritis. In the study carried out, the prevalence of H. pylori infection is considerably at the Sidi Bel Abbès Hospital Center, whose age groups (20-30 and 51-60 years) presented the highest high prevalence of H. pylori, accompanied by a very high rate of gastritis, which constitutes a field at full risk for the occurrence of gastric cancer. Ulcer rate is highest (33.7%) in age groups (51-60 years) and increases significantly to 60% in patients with gastric cancer age groups (61-70 years). The study of the antagonistic activity of Bifidobacterium spp, Lactobacillus spp., Streptococcus thermophilus against Helicobacter pylori by the agar diffusion method showed a significant inhibition of the growth of the pathogenic germ, against of the strain (HP14), with diameters of the zones of inhibition of (15, 9, 7 mm) respectively, an average activity antagonist against the strain (HP90) with diameters of the zones of inhibition of (12, 8, 5 mm) respectively and low strain antagonistic activity (HP123), with diameters of the inhibition zones of (8.5, 3 mm) respectively.. The characterization of the molecules present in the supernatant of the Bifidobacterium spp culture, during their inoculation in a liquid culture medium and the neutralization of the effect of the organic acids, showed their protein nature. Amplification of the DNA fragments encoding the Ure C region of the isolated strain incriminated in gastric cancer and their sequencing revealed that they belong to the genus Helicobacter pylori with a 99% degree of homologyHelicobacter pylori is a germ responsible for multiple gastroduodenal pathologies such as gastritis, ulcer and gastric cancer whose infection affects half of the world's population, mainly in developing countries. The objective of this work is the evaluation of the frequency of gastrointestinal cancers, in particular gastric cancer according to age and gender, the determination of the prevalence of Helicobacter pylori, a bacterium implicated in stomach cancer. at the level of the wilaya of Sidi Bel Abbes during the years (2012-2014), the study of the impact of various epidemiological factors and the exploration of the main