Isolement et caractérisation des bactéries productrices de protéases à intérêt biotechnologique

Abstract

Les producteurs d’enzymes ont effectué des recherches afin de trouver des alternatifs moins dispendieux en utilisant les sols riches en protéines comme substrat prometteur économique, afin de stimuler la production à des coûts moindres et valoriser les sous produit issu du sol. Dix (10) échantillons de sols riches en protéines où les déchets sont soumis à une fermentation naturelle, prélevés dans les environs de la ville de Chlef, en Algérie à partir des sols entourant, les laiteries, les abattoirs, les usines des alimentations de bétails et les sols riches en matières organiques en décomposition, ont fait l’objet d’une analyse microbiologique à fin de déterminer la diversité des bactéries productrices de la protéase. Le screening primaire a permis l’isolement de 115 souches protéolytiques, parmi lesquelles, 15 sont sélectionnées dans le screening secondaire comme les plus performantes et sont retenues pour être identifiées dans un premier temps par une caractérisation phénotypique, suivie d’une caractérisation génotypique par la technique de la PCR et le séquençage du gène codant l’ADNr 16S. L’utilisation de l’outil de la biologie moléculaire a permis une identification génétique des souches sélectionnées productrices de la protéase et l’analyse phylogénétique. Dans le but d’augmenter la production de la protéase chez les souches isolées sélectionnées, un certain nombre de paramètres tels que la source de carbone et d’azote, la température, le pH, le temps de réaction et la concentration en inoculum sont optimisés. Les résultats obtenus ont montré que chez les souches (T₂, T₂op, TB₂op, T₂', AH₂(-2), Xg₄, P₂op, E₃S₃P, H₁(-6), NB₁op,Y₄, LV₂, E₃S₄p, E₃S₁IBN et P₁op) une production maximale est obtenue après 48heures d’incubation lors de leurs inoculation sur un milieu de culture de production contenant : 1g/l glucose, 1g/l amidon, 1g/l caséine, 1% peptone et 2% d’inoculum avec des taux de production de (1,60, 1,45, 1,50, 1,80, 1,65, 1,30, 1,30, 1,70, 1,50, 1,65, 1,62, 0,95, 1,55, 1,48et 0,60 UI /ml) respectivement. L’activité protéolytique est mesurée et l’analyse de la pureté est ensuite effectuée par SDS-PAGE en conditions dénaturantes révélant l’apparence de bandes protéiques de poids moléculaires différents suggérant que ces enzymes sont homogènes, ce qui confirme que les souches isolées ont des activités protéolytiques différentes.